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凝胶成像系统的介绍

2021-11-18 22:17:21来源:一大把网站作者:北京六一生物科技有限公司
凝胶成像系统是用不同染色(如EB、考马斯亮蓝、银染、sybr绿)和非化学发光成像(如微孔板和平板)对DNA/RNA/蛋白质凝胶电泳进行检测和分析。凝胶成像系统可用于常规生物工程研究,如分子量计算、密度扫描、密度定量和聚合酶链式反应的分析定量工作。 样品在电泳凝胶或其他载体上的迁移率不同,因此与标准品或其他替代标准品进行比较将对未知样品进行定性分析。这是图像分析系统的定性基础。未知样品可以根据其在地图中的位置进行定性分析,根据未知样本在凝胶中的迁移率并辅助marker来对未知样本进行分子量大小标定,鉴别目的产物等确定成分和性质的定性分析工作。 样品部分吸收投射光或反射光,因此样品条在通过摄影获得的图像上的光密度会不同。光密度与样品的浓度或质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过与已知浓度的样品条的光密度进行比较,可以得到未知样品的浓度或质量。这是图像分析系统的定量基础。采用新的紫外透射光源和透射光源技术,使光线分布更加均匀,大限度解决光密度不均匀的影响。 一般来说,凝胶成像系统可应用于:凝胶成像系统可用于蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、聚氨基酸等生物分子的分离纯化结果的定性分析。 分子量定量。对于常用的DNA膜,利用分子量量化功能在胶上标注DNA Marker条带的已知分子量,自动生成拟合曲线,并以此测量未知条带的分子量。用这种方法得到的结果比肉眼估计的结果要准确得多。 定量密度。测定DNA和RNA浓度常用的方法是紫外吸收法,但只能测定样品中总核苷酸浓度,不能区分不同长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件,先标定DNA胶片上某个已知DNA含量的标准条带的密度,然后方便点击其他未知条带,通过与已知条带的密度对比,即可得到未知DNA含量。该方法也适用于测定PAGE蛋白胶带的浓度。 密度扫描。在分子生物学和生物工程的研究中,常用的方法是计算蛋白质表达产物在整个细菌蛋白质中的百分比。传统的方法是使用特殊的密度扫描,但这项工作可以通过使用生物分析软件结合实验室常规扫描仪直接照射的凝胶成像系统来完成。 聚合酶链式反应定量。PCR定量主要是指如果PCR实验扩增出多个目的条带,可以通过软件计算出每个条带占总条带的相对百分比。就这个功能而言,和密度扫描类似,但实际上原理不同。聚合酶链式反应定量是量化选定条带的相对密度,并计算它们在总和中的百分比。在密度扫描期间,为选定区域生成纵向扫描曲线并进行积分。

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